光镜和电镜研究领域的巨大进步目前正在提高科学家们对多种病毒可视化研究的能力,比如HIV、呼吸道合胞体病毒、麻疹病毒、流感病毒以及寨卡病毒等,近日,一项刊出在国际杂志NatureProtocols上的研究报告中,来自埃默里大学医学院等研究机构的研究人员通过研究研发出有了一种新型的低温涉及的光镜和电镜工作流(工作站,cryo-CLEM)。此前研究中,研究者对提纯的病毒展开研究需要提供多种未知病毒电子显微镜图像,然而病毒提纯的过程经常不会使得包膜病毒的结构再次发生转变,因此研究者Wright及同事就对当前技术展开了提高来研究病毒的结构特性,因此如今研究者就需要确切仔细观察到病毒转入细胞并在细胞中装配的信息了。
研究者回应,我们十分想要告诉某些病毒如何在细胞中拷贝,如今我们在光镜和电镜之间创建了一种“桥梁”,我们期望通过这种联合技术需要更为确切地仔细观察病毒的起到机制。文章中,研究者首先在脆性碳覆盖面积的黄金网格中对病毒感染或转染的细胞展开培育,随后展开玻璃化操作者,即对细胞较慢加热以免冰晶构成,一旦细胞被加热研究人员就需要利用低温荧光显微镜和低温电子断层扫描法术对细胞展开研究,低温(负150度以下)对于这两种技术而言十分适当,而且样品玻璃化后展开光学显微镜检查还需要诱导细胞之后生长以及方位再次发生转变。研究者认为,利用低温电子断层扫描法术取得的数据还需要协助我们在高分辨率下提供单一原始病毒和病毒蛋白的图像,这项研究中研究者对呼吸道合胞体病毒展开了研究,他们找到,候选减毒活疫苗在结构上同呼吸道合胞体病毒结构十分相近。
这种取名为cryo-CLEM的新技术需要对扁平生长的细胞展开研究,因为标准的光束并不需要击穿厚度小于1微米的细胞,而哺乳动物的细胞一般来说有几微米长,而诸如HIV等病毒约为0.1微米。本文研究中,研究人员研发的新型cryo-CLEM技术也许还需要协助研究还包括神经细胞或细菌生物被膜在内的多个系统的功能。
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